Постановка РМА (реакция макроагглютинации) на стекле при заболеваниях пчел
Используется для диагностики американского гнильца и дифференциации возбудителей других гнильцовых болезней.
Для этой реакции необходимы:
- бактериальный антиген 2—3-суточная культура, выделенная на плотной питательной среде;
- специфические гиперимунные сыворотки кроликов против возбудителя американского гнильца, а при подозрении на смешанную инфекцию и против возбудителей европейского гнильца и парагнильца – нормальная кроличья сыворотка;
- предметные стекла и бактериальная петля.
Специфическую сыворотку разбавляют физиологическим раствором до рабочего разведения, которое равняется удвоенному предельному титру, указанному на этикетке упаковки. На обезжиренное предметное стекло наносят каплю разведенной специфической сыворотки против возбудителя выделенной культуры гнильца, а на другом конце стекла — каплю нормальной сыворотки кролика в разведении 1:100. Готовят по 2-3 препарата к каждой выделенной культуре возбудителя гнильца, затем в каждую каплю сыворотки на стекле вносят снятую бактериологической петлей микробную массу из выделенной 2—3-суточной агаровой культуры каждого исследуемого образца расплода и тщательно перемешивают петлей. РМА сопровождается контролем антигена и контролем сыворотки и ставится при комнатной температуре (18—22 градуса). Реакцию учитывают невооруженным глазом или с помощью лупы (увеличение X 2).
РМА считается положительной, если в капле со специфической сывороткой через 2—4 мин. наступает просветление и образование четкой агглютинации с образованием белых крупинок. В контрольной капле с нормальной сывороткой и антигеном — равномерное помутнение. Реакция микроагглютинации отличается высокой специфичностью. Таким образом, предлагаемая схема, включающая обнаружение характерных клинических признаков поражения расплода, проведение микроскопических и бактериологических исследований патматериала с выделением чистой культуры возбудителя и ее серологической идентификацией, позволяет ускорить анализ и установить точный диагноз на американский гнилец через 4—5 дней. При смешанной инфекции с помощью этой схемы можно дифференцировать от возбудителей других бактериальных гнильцовых болезней расплода пчел.
В случае получения сомнительных результатов исследований проводят идентификацию выделенных культур возбудителя американского гнильца по биохимическим свойствам. Для определения ферментативных свойств чистой культуры бациллы ларве ее высевают, а питательные среды цветного ряда смешивают с углеводами, к которым добавляют 10 % стерильной лошадиной сыворотки без консерванта. Культуру бациллы ларве на этих средах выращивают в течение 5—7 дней. Одновременно выделенные культуры высевают в пробирки с молоком, желатином, сывороточным МПБ с реактивами для определения сероводорода и индола.
Способность восстанавливать нитраты в нитриты изучают путем высева культуры в сывороточный МПБ с 1 % нитрата калия. После 2—3-суточного инкубирования в пробирку вносят 0,5 мл 0,5%-ного водного раствора крахмала и столько же 0,5%-ного водного раствора йодистого калия и тщательно перемешивают, добавляют одну каплю 5%-ного раствора серной кислоты и взбалтывают. Темно-синий цвет среды свидетельствует о присутствии нитрита калия. Каталазную активность определяют на предметном стекле внесением петлей в каплю 3%-ного раствора перекиси водорода суточной культуры возбудителя, при этом газ не выделяется. Все типичные штаммы бациллы Ларве медленно расщепляют глюкозу, мальтозу, маннит, не сбраживают арабинозу, ксилозу, лактозу, сахарозу, галактозу, дульцит, сорбит; разжижают желатин, свертывают и пептонизируют молоко, некоторые штаммы дают следы сероводорода. Индола не образуют, восстанавливают нитраты в нитриты, не образуют каталазу.
Для серологической диагностики американского гнильца разработаны методы постановки пробирочной реакции преципитации и реакции диффузионной преципитации (РДП) в агаровом геле. Антигеном для этих реакций служит прозрачный фильтрат из погибших личинок пчел и выросшей культуры возбудителя болезни на физиологическом растворе с добавлением 0,5 % фенола. К погибшим личинкам добавляют в десятикратном количестве физраствор, после тщательного растирания суспензию нагревают на кипящей водяной бане 15 мин. и экстрагируют в холодильнике 24 ч. при температуре 3—4 ° С. Затем экстракт фильтруют через асбестовую вату до получения прозрачной жидкости. Выделенную агаровую культуру возбудителя смывают физраствором, фильтруют через асбестовую вату и используют для реакции. В реакции применяют специфическую сыворотку, полученную при гипериммунизации кроликов.
В уленгутовские пробирки наливают по 0,1—0,2 мл исследуемого фильтрата из личинок или агаровой культуры возбудителя и подслаивают столько же преципитирующей сыворотки. Контролем для реакции являются приготовленные таким же образом фильтраты из здоровых личинок пчел или чистой культуры возбудителя. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 15 мин. При положительной реакции через 0,5—2 мин. в пробирках между слоями фильтрата и сыворотки образуется тонкое голубовато-матовое кольцо.
Патогенность заболевания пчел – европейский гнилец | Профилактика заболеваний пчел |
Ого, столько информации, я трудновато её восприняла. Много чего не понятного.
Чет непоняла ,гнильцовые болезни у человека или еще у кого то?